Editorial:
En esta nueva edición les acercamos información renovada y actualizada sobre diferentes áreas de interés en la Bioquímica.
Les hacemos llegar un trabajo sobre los microRNAs y su importancia como posibles biomarcadores y dianas terapéuticas en enfermedades osteoporóticas. El Área de Hemostasia de laboratorios MANLAB nos presenta un informe sobre las herramientas disponibles para la detección y titulación del inhibidor específico anti-factor VIII de la coagulación. También publicamos un trabajo donde implementan una nueva metodología para la separación de proteomas del plasma humano mediante electroforesis bidimensional, lo que permitirá su aplicación en estudios exploratorios para la identificación de potenciales biomarcadores de diferentes patologías. De igual manera le presentamos un trabajo en el cual utilizan hibridación in situ fluorescente como herramienta de diagnóstico en las hemopatías malignas. Además, les acercamos una actualización sobre los nuevos enfoques diagnósticos de la enfermedad de von Willebrand, poniendo especial énfasis en los aspectos fenotípicos y genotípicos. Por último, incluimos en este número un artículo sobre toxoplasmosis, en él destacan la importancia de generar conciencia y tener presente las formas de adquirir la enfermedad y las medidas de precaución.
Dr. Gerardo De Blas
Director de Contenidos
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Nota 1: ¿Qué son los microARNs? Posibles biomarcadores y dianas terapéuticas en la enfermedad osteoporótica
Los micro-ARN (miRs) son peque-ñas moléculas de ARN (21-23 nucleótidos), no codificantes que regulan la expresión génica a nivel post-transcripcional. Están implicados en la regulación de varios procesos biológicos, como la diferenciación celular, la proliferación, la apoptosis y en el desarrollo embrionario y tisular. Actual-mente son un importante foco de interés para el estudio de diversas enfermedades como el cáncer o la diabetes mellitus tipo 2. A nivel del metabolismo óseo, están surgiendo diversos miRs implicados en su regulación, abriendo un campo de investigación importante para identificar nuevos biomarcadores para el diagnóstico de la enfermedad osteoporótica, de su evolución, así como para diseñar nuevas terapias farmacológicas.
Autores: Giner M1,2, Montoya MJ3, Vázquez MA3, Miranda C1, Miranda MJ1, Pérez-Cano R1,3
Resumen:
Los miRs fueron descubiertos en 1993 al estudiar la regulación del desarrollo del nemátodo Caenorhabditis elegans (1). Son pequeñas moléculas de ARN (21-23 nucleótidos), no codificantes para proteínas que constituyen una extensa familia de genes reguladores postranscripcionales. Están implicados en la regulación de varios procesos biológicos, como la diferenciación celular, la proliferación, la apoptosis y en el desarrollo embrionario y tisular (2). Funcionan como un gen epigenético endógeno y, aunque generalmente silencian genes diferentes de aquellos de los cuales se han
transcrito, existen también miRs con función promotora y/o coactivadora para otros genes (3).
Desde su descubrimiento se han convertido en uno de los temas más estudiados en el campo de la regulación epigenética de las células, y actualmente se encuentra disponible gran cantidad de información que nos ha llevado a conocer mejor los procesos biológicos en los que están implicados. Todo ello ha hecho que recientemente sean un foco de interés para la medicina como dianas terapéuticas en multitud de enfermedades. Hasta el momento actual, han sido descritas más de 2.000 secuencias distintas de miRs en humanos, recogidas en la base de datos de miRBase (http://www.mirbase.org).
Nota 2: Detección y titulación de inhibidor específico anti-factor VIII de coagulación
El factor VIII de la coagulación circula en plasma sanguíneo unido al factor de von Willebrand, tiene un rol crucial en la etapa de amplificación de la generación de trombina al activarse el sistema de coagulación. La deficiencia congénita del factor VIII se denomina Hemofilia A. Existen pacientes con un síndrome clínico similar a la hemofilia A congénita, pero con niveles de síntesis del factor normales, sin embargo, se ha detectado la presencia de un inhibidor adquirido contra el factor VIII, a este trastorno se lo conoce como hemofilia adquirida. Ésta es una patología autoinmune que suele mostrar sangrados repentinos en pacientes sin coagulopatías previas. Es una enfermedad hemorragípara infrecuente producida por autoanticuerpos específicos contra el factor VIII. En la siguiente nota el Área de Hemostasia de laboratorios MANLAB nos presenta un informe sobre las herramientas disponibles para la detección y titulación del inhibidor específico del anti-factor VIII de coagulación destacando la importancia del diagnóstico precoz para un rápido tratamiento de pacientes con hemorragias.
Autores: Leonardo Bello, Ricardo Raúl Forastiero
Resumen:
El factor VIII de la coagulación tiene un rol crucial en la etapa de amplificación de la generación de trombina al activarse el sistema de coagulación. Circula en plasma sanguíneo unido al factor von Willebrand lo que permite o facilita su estabilidad. La deficiencia congénita del factor VIII se denomina Hemofilia A y puede presentarse en grado leve, moderada o severa en relación al nivel plasmático del factor VIII. La hemartrosis (sangrado en articulaciones) es la principal complicación en casos de hemofilia A severa (FVIII <1%).
Sin embargo, se puede presentar en algunos pacientes un síndrome clínico similar a la hemofilia A congénita pero que presentan niveles de síntesis del factor normales. En esos casos se detecta la presencia de un inhibidor adquirido contra el factor VIII y el trastorno se conoce como hemofilia adquirida. Es una patología autoinmune que suele mostrar sangrados repentinos en pacientes sin coagulopatía previa. Es una enfermedad hemorragípara infrecuente producida por autoanticuerpos específicos contra el factor VIII. Se presenta en general en pacientes añosos y de sexo masculino y además en mujeres durante el embarazo y particularmente en el periodo post parto. Su incidencia es rara con una prevalencia de 0.2-1.9 pacientes/100000/año.
La hemofilia adquirida se manifiesta clínicamente como hematomas espontáneos o con mínimos traumatismos a nivel muscular y tejido celular subcutáneo. En algunos casos se producen hemorragias a nivel digestivo, pulmonar, hemorragia postparto o del sistema nervioso central. El sangrado puede ser severo con una alta mortalidad. El inhibidor relacionado al embarazo ocurre principalmente entre el 2do y 5to mes post parto.
Nota 3: Implementación de una metodología para la separación de proteomas de plasma humano mediante electroforesis bidimensional
El conjunto de proteínas expre-sado por un organismo, tejido o célula, es conocido como proteoma. Éste es único y específico para cada estado biológico La proteómica se basa en la separación de las proteínas presentes en una muestra bioló-gica mediante técnicas de alta resolución. En el siguiente trabajo se utilizó la electroforesis bidimensional para la separación de proteomas a partir del plasma sanguíneo, lo que permitirá su aplicación en estudios exploratorios para la identificación de potenciales biomarcadores de diferentes patologías.
Autores: Ruth Andrea Rodríguez1, Wilmer Alexis Urrego1, María Carolina Sanabria1,2, Myriam Sánchez-Gómez1, Adriana Umaña-Perez1
Resumen:
El conjunto de proteínas expresado por un organismo, tejido o célula, es conocido como proteoma. Este proteoma es único y específico para cada estado biológico particular y su estudio permite un acercamiento a la(s) proteína(s) responsables del fenotipo de interés. La investigación proteómica se basa en la separación de las proteínas presentes en una muestra mediante técnicas de alta resolución, tales como electroforesis bidimensional en geles de poliacrilamida (2DE, por su nombre en inglés) o cromatografía líquida de alta
eficiencia (HPLC, por su nombre en inglés), ambos acoplados a la identificación de proteínas mediante espectrometría de masas en tándem (MS/MS) .
Muchos factores relacionados con la toma, almacenamiento y procesamiento de la muestra, influyen en la calidad de los proteomas separados. Es bien sabido que la implementación de esta metodología requiere de personal experimentado para conseguir una alta reproducibilidad, garantizando de esta manera la confiabilidad de los resultados.
Este tipo de estudios se puede realizar en muestras de tejido y en fluidos biológicos como la orina y derivados sanguíneos (2,5), lo que refleja el estado fisiopatológico de un organismo. Particularmente, el análisis proteómico en plasma y suero se ha convertido en una importante herramienta para el descubrimiento de biomarcadores proteicos, aunque su caracterización exhibe algunos desafíos relacionados con el amplio rango dinámico que abarca más de 10 órdenes de magnitud en términos de concentración de proteínas. En relación a lo anterior, se han propuesto estrategias para reducir la complejidad del plasma y el suero sanguíneo, entre las que destacan: la precipitación selectiva de proteínas, la depleción de proteínas de alta abundancia y el enriquecimiento de proteínas de baja abundancia, pero el uso de estas estrategias es aún controversial.
Nota 4: Hibridación in situ fluorescente: herramienta en el diagnóstico de las hemopatías malignas.
Las neoplasias hematológicas se caracterizan por presentar gran heterogenei-dad genética. El desarrollo de la citogenética molecular a través de la hibridación in situ por fluorescencia (FISH, por su sigla en inglés) se convirtió en un avance importante en el diagnóstico citogenético de estas neoplasias. La aplicación de este análisis aportará datos de valor pronóstico con importantes implicaciones clínicas y terapéuticas en el diagnóstico de las neoplasias hematológicas.
Autores: Dra. Kalia Lavaut Sánchez, Lic. Norbelys Hernández Aguilar, Lic. Vera Ruiz Moleón.
Introducción: Las neoplasias hematológicas tienen origen clonal y se caracterizan por presentar gran heterogeneidad genética. El desarrollo de la citogenética molecular a través de la hibridación in situ por fluorescencia (FISH, por su sigla en inglés) se convirtió en un avance importante en el diagnóstico citogenético de estas neoplasias.
Objetivo: describir las alteraciones cromosómicas detectadas en pacientes con neoplasias hematológicas a partir de la introducción de esta técnica. Métodos: se realizó un estudio descriptivo de po transversal de pacientes con neoplasias hematológicas en el Laboratorio de Citogenética del Instituto de Hematología e Inmunología (IHI), en el período comprendido entre julio de 2014 y abril de 2015. Se utilizó la técnica de FISH con las sondas fluorescentes específicas. Resultados: se estudiaron 87 muestras correspondientes a diferentes pos de neoplasias hematológicas. Con la sonda LSI BCR/ABL se observaron 18 casos positivos de leucemia mieloide crónica y los ocho pacientes con leucemia linfoide aguda fueron negativos. Se marcaron con sonda PML/RARα 17 muestras con diagnóstico de leucemia promielocíca:10 fueron positivas. Se procesaron 8 muestras con la sonda LSI RUNX1/RUNX1T1, una resultó positiva. Dos muestras marcadas con sonda LSI RB1 (13q14) y una con LSI TP53 (17p13.1), resultaron negativas se observó un caso positivo de deleción 7q31.
Nota 5: Factor von Willebrand y Enfermedad de von Willebrand: nuevos enfoques diagnósticos.
El factor de von Willebrand (VWF) es una glicoproteína que se sintetiza en células endoteliales y en megacariocitos. Promueve la adhesión plaquetaria al su endotelio, la agregación plaquetaria y transporta al FVIII en plasma, protegiéndolo de su degradación por proteasas. La enfermedad de von Willebrand (VWD) es el defecto hemorrágico congénito más frecuente. En el siguiente trabajo les acercamos una actualización que les permitirá una mejor comprensión, clasificación de la enfermedad, interpretación y utilidad de los elementos diagnósticos disponibles, poniendo especial énfasis en los enfoques fenotípicos y genotípicos.
Autores: Adriana Inés Woods1a, Alicia Noemí Blanco1b, Ana Catalina Kempfer1a, Juvenal Paiva2, Emilse Inés Bermejo1b, Analía Sánchez Luceros1, 3a, b, María Angela Lazzari3a.
Introducción:
La enfermedad de von Willebrand (VWD) es el defecto hemorrágico congénito más frecuente. La prevalencia estimada varía según se considere el número de pacientes sintomáticos registrados en centros de hemofilia (0,0023-0,06%) o los estudios poblacionales (0,6-1,3%), dependiendo también de los criterios diagnósticos utilizados. Además de los defectos congénitos, hay formas adquiridas (AVWS), cuya prevalencia se estima en 0,04%.
Mucho de lo que se sabe actualmente sobre la VWD surgió en la década de
1970, a partir de los primeros ensayos para determinar el antígeno del factor von Willebrand (VWF:Ag); pero fue la clonación del factor VIII (FVIII) y del factor von Willebrand (VWF) en la década de 1980, lo que permitió evidenciar la diferencia genética entre ambos factores y dar las bases moleculares para la comprensión del defecto. Se produce por la deficiencia y/o defecto del VWF, glicoproteína multimérica que circula en el plasma unido al FVIII de la coagulación, formando un complejo (FVIIIVWF). Su modo de herencia es autosómico.
La molécula del VWF contiene varios sitios funcionales de unión a ligandos; es capaz de unirse a receptores plaquetarios como la glicoproteína Ib (GPIb) y IIbIIIa (GPIIb-IIIa), a componentes de la matriz subendotelial como el colágeno y al FVIII (3). Es útil tener presente las abreviaturas aceptadas internacionalmente para denominar a las proteínas y sus funciones.
Nota 6: La Toxoplasmosis observada como un problema no resuelto.
La Toxoplasmosis es la enfermedad parasitaria más frecuente en el mundo, expandida a todos los continentes con una seroprevalencia que oscila entre el 30-80 % en el humano. Su agente etiológico es el Toxoplasma gondii. Su alta prevalencia y formas infectivas son la causa que al menos 500 millones de personas estén infectadas en el mundo. Esperamos con el siguiente trabajo generar conciencia de la gran importancia de tener presente las formas de adquirir la enfermedad y las medidas de precaución.
Autores: Rolando Sánchez Artigas, I Dailin Cobos Valdés,II Liana Sánchez Cruz,III ,Antonio Miranda Cruz,II Leonardo Camejo Roviralta,IV Liliana Araujo BaptistaI
Resumen:
La Toxoplasmosis originaria de América del Sur, (1) es la enfermedad parasitaria más frecuente en el mundo expandida a todos los connentes con una seroprevalencia que oscila entre el 30-80 % en el humano, su agente eológico, Toxoplasma gondii (T. gondii), descubierto por Nicolle y Manceaux, en 1908. Es un paradigma de zoonosis caracterizada por su gran endemicidad, determinada por sus formas de multiplición; asexual que afecta a más de 200 especies que incluyen, los mamíferos, aves y peces,
incluido el hombre y un ciclo sexual que ocurre en el intestino delgado del gato doméstico que le ha permitido mantener su especie. Su alta prevalencia y formas infectivas son la causa que al menos 500 millones de personas estén infectadas en el mundo.
Toxoplasma gondii, clasificado según su taxonomía, como un parásito intracelular obligado, móvil, gram negativo, sin hospedero específico (euríxeno); tiene forma arqueada, semilunar y carece de flagelos, con autonomía de movimientos de rotación helicoidal, en los que participa toda la célula gracias a las fibrillas dispuestas sobre su superficie. Su tamaño varía según el órgano de donde procedan, entre 2-12 x 1.54 μm.
